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一分钟带你了解动脉平滑肌细胞的原代培养流程

发布时间:2021-05-20浏览:47次
  动脉平滑肌细胞又叫平滑肌纤维,系构成平滑肌的纤维状长细胞。在制作切片标本时,如肌细胞收缩则可变粗,核也随之变粗,甚至可出现螺旋形的扭曲。平滑肌细胞外面包有1层肌膜。每个平滑肌细胞周围有少量纤细的胶质纤维、弹力纤维及网状纤维,包绕于肌膜的表面。
  
  动脉平滑肌细胞培养:取5kg左右实验兔,于无菌条件下从枕大孔处用大止血箝扳开颅骨暴露并小心取出脑组织放入装有DMEM的培养皿中,用眼科镊分离基底动脉后按常规平滑肌方法贴块培养。
  
  细胞原代培养:
  
  1、吸除培养瓶内旧培养液。
  
  2、D-Hanks液冲洗2遍。
  
  3、加入消化液少许,以能覆盖瓶底为限。
  
  4、倒置显微镜观察发现细胞胞质回缩、细胞间隙增大时,立即终止消化。
  
  5、吸除消化液,向瓶底注入D-Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残留消化液冲掉。
  
  6、用吸管吸取培养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液;初次传代将原代细胞按1:1传代,此后按1:3进行传代。
  
  7、传代后细胞放置在37℃,5%CO2孵育箱内培养。
  
  平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏。
  
  当动脉平滑肌细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持形态学特征和生长特点。