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还不懂大鼠肝实质细胞分离方法的请看过来!

发布时间:2021-04-21浏览:88次
  大鼠肝实质细胞分离自肝脏组织;肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官,并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用;肝脏也制造消化系统中之胆汁。
  
  肝实质细胞是指具有肝功能的单位,是肝脏的基本组成单位之一。细胞的线粒体很多,每个细胞大约有1000个左右,遍布于胞质内。
  
  大鼠肝实质细胞的分离方法
  
  1、大鼠以3%C11H17N2NaO3麻醉后,依次碘酒、乙醇消毒。
  
  2、以十字型切口打开腹腔,暴露内脏,将肠管推向腹腔的左侧,暴露出下腔静脉和门静脉,首先游离出下腔静脉,将胆总管结扎。然后分离门静脉,将其分支一一结扎,并在门静脉的近端和远端分别预置“0”号丝线一根,用针管内预先吸有肝素的l8号套管针穿刺门静脉,退出针芯,见门静脉有回血后结扎固定,迅速接通灌注系统,并剪开下腔静脉建立流出道,以20ml/min的速率灌注预灌注液(37℃),同时将肝脏完整地分离下来,置入一平皿中。
  
  3、灌注约10min后,肝脏完全变为淡黄褐色,关闭预灌注液三通开关,以15ml/min速率灌注50ml(25mg)链蛋白酶E灌注液,然后再以15ml/min速率灌注含Ⅳ型胶原酶的灌注液(37℃)。
  
  4、将一根一次性输液管一端浸入培养皿液面以下,另一端插入胶原酶溶液瓶,建立胶原酶的循环灌注。
  
  5、20~25min后,当肝脏组织完全变软,撕去肝包膜,去除结缔组织,钝性粉碎肝组织制备细胞悬液。
  
  6、将细胞悬液倒入一预先装有100ml、37℃预热的振荡消化液硅化三角烧瓶中,将三角烧瓶放恒温振荡器中振荡消化30min(200r/min,37℃),振荡消化后的细胞悬液依次经120目、300目钢网过滤,收集于2个50ml聚丙烯离心管中。
  
  7、1700r/min离心5min(4℃),吸弃上清液。每管加入40mlRPMI1640液,反复吹打,使细胞充分悬浮。
  
  8、200r/min离心2min(20℃)2次,使细胞悬液中剩余的肝细胞沉淀,去除大鼠肝实质细胞。