咨询热线
13627218621
ARTICLE/ 技术文章
首页  >  技术文章  >  细胞该怎么冻存,一篇文章告诉你

细胞该怎么冻存,一篇文章告诉你

发布时间:2021-03-31浏览:269次
   人小梁细胞主要功能:
   (1) 人小梁网细胞分离自人眼的近小管组织和角巩膜区域。
   (2) 小梁网细胞在房水流动机制中发挥重要作用。
   (3) 在小梁网细胞中有特定的神经递质和神经肽受体,其中包括肾上腺素,乙酰胆碱和神经肽Y。
(4) 小梁网细胞可合成不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。

   材料准备:
   1.  仪器:净化工作台、 离心机、恒温水浴箱、冰箱(4℃、-20℃、-70℃)、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱。
   2.  玻璃器皿:吸管(弯头、直头)、 培养瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、废液缸。
   3.  塑料器皿: 吸头、枪头、胶塞、移液管(10ml)、15ml离心管、冻存管(1~2ml)。
   4.  其他物品:微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪。
   5.  试剂:D-Hanks液、胎牛血清、培养液、双抗(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶(0.08%)、1NHCl、7.4%NaHCO3、DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油。

   细胞冻存:

   1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌种保存很少用于细胞冻存。
   2、取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。
   3、离心1000 rpm,5 min。
   4、去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5x10^6/ml~1x10^7/ml。
   5、 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者。
   6、冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min;当温度达到-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

    细胞复苏:
   1.  从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。
   2.  从37℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀。
   3.  离心, 1000 rpm,5 min。
   4.  弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养。
   5.  次日更换一次培养液,继续培养。