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简单概述真皮成纤维细胞的制备培养步骤

发布时间:2021-02-23浏览:181次
  真皮成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。细胞来源于皮肤组织,是一种贴壁培养方式的细胞,由于这些细胞非常容易培养,它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。
  
  成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。
  
  一般而言,成纤维细胞能够分泌I型和III型胶原等细胞外基质,并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时,真皮成纤维细胞由可增殖,可迁移的表型变为有收缩性的,可重塑基质的表型,同时,它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。
  
  真皮成纤维细胞的制备方式:
  
  1、首先在分离的细胞时要做到在无菌条件下进行,打开生物安全柜紫外灯进行30min作无菌处理。
  
  2、将手术废弃的皮肤组织浸泡75%酒精,消毒2min。
  
  3、将皮肤组织置含P/S的PBS中清洗至少3遍,然后用眼科剪除去脂肪及结缔组织等。
  
  4、将皮肤剪成0.5*0.5cm小块,放入dish中,加0.1%的dispase溶液,封口膜封口,4℃冰箱过夜消化。
  
  5、24小时后用镊子将表皮与真皮分开(薄的那层是表皮,厚的那层是真皮),
  
  6、将真皮剪碎,移至离心管,用0.1%胶原Ⅰ型酶+0.1%胶原Ⅱ型酶+0.1%胶原Ⅳ型酶+37℃水浴锅中消化至少2h(视消化程度而定)。
  
  7、用100μm网筛过滤,取滤液,300g,离心5min,用完全培养基重悬沉淀(每隔一天都必须换液)。
  
  以上是真皮成纤维细胞分离培养的一种方式,不同的技术人员分离培养的方法也不同,使用的试剂比例也不尽相同。细胞纯度可高达于90%,所有的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。