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大鼠肺成纤维细胞如何进行细胞传代,有哪些方法?

发布时间:2021-02-03浏览:45次
  大鼠肺成纤维细胞取自新鲜的组织,按照标准操作流程分离培养。多呈长梭形,具有突起,细胞胞体较大,胞质弱嗜碱性,胞核较大呈椭圆形,染色质疏松色浅,核仁明显。
  
  刚分离的肺成纤维细胞呈圆形,较亮,培养40min左右贴壁,12~24h左右伸展,36~48h进入对数生长期,分离纯化3d后接近融合,并彼此连接成网状。
  
  肺成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括:构造和维持肺器官的正常形态,合成和释放细胞外基质,以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
  
  大鼠肺成纤维细胞使用方法:
  
  1、取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
  
  2、待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
  
  3、细胞传代
  
  ①吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次。
  
  ②添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴1~2min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入完全培养液终止消化。
  
  ③用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
  
  ④待大鼠肺成纤维细胞完全贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。