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关于心房肌细胞的培养、缺氧预处理的问题说明

发布时间:2021-01-20浏览:252次
  心房肌细胞又称心肌纤维,有横纹,受植物性神经支配,属于有横纹的不随意肌,具有兴奋收缩的能力。呈短圆柱形,有分支,其细胞核位于细胞中央,一般只有一个。那么,心肌细胞该如何进行培养和缺氧预处理呢?下面,小编就这些问题进行一一解答。
  
  一、心肌细胞培养
  
  选取出生1~2dSPF级大鼠,采用75%乙醇皮肤消毒后,开胸剪下心脏,剔除心包、心房和大血管等,去除残血,将心肌剪成约1mm3的碎块,采用0.125%不含乙二胺四乙酸的胰酶复合0.1%Ⅰ型胶原酶混合多次消化,200目筛网过滤获取心房肌细胞,差速贴壁70min并结合5-BrdU化学抑制法提纯心肌细胞,培养细胞隔天换液。原代心肌细胞采用含10%胎牛血清的高糖培养基培养。
  
  二、心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的制备
  
  心房肌细胞培养72h后,替换不含血清的低糖培养基,并置于厌氧培养袋中(内含厌氧产气袋和氧含量指示条),充入纯氮气2min,迅速密封厌氧袋,构建缺氧环境(O2%<1%)。缺氧3h后,更换为含10%胎牛血清的高糖培养基,置于37℃、95%空气-5%CO2无菌培养箱中继续培养6h。
  
  三、心肌细胞缺氧预处理
  
  根据预实验的结果,将心房肌细胞培养72h后,替换不含血清的低糖培养基,并置于厌氧培养袋中(内含厌氧产气袋和氧含量指示条),充入纯氮气2min,迅速密封厌氧袋,构建缺氧环境(O2%<1%)。缺氧30min后,更换为含10%胎牛血清的高糖培养基,置于37℃、95%空气-5%CO2无菌培养箱中继续培养30min。