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鼠角膜上皮细胞进行冻存的7大步骤说明

发布时间:2020-12-25浏览:108次
  鼠角膜上皮细胞提取物是从鼠原代角膜上皮中提取的,从正常大鼠眼组织制备,可以直接用于基因克隆及各种分子生物学实验的研究。收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h,再进行后续的实验操作。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
  
  细胞提取物的冻存:
  
  1、鼠角膜上皮细胞提取物规格在高细胞浓度情况下进行培养细胞的冻存,并且细胞传代次数尽可能少。确保冻存前细胞的活性至少为90%,请注意冻存条件取决于所用细胞系。
  
  2、细胞应缓慢冷冻,可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器使温度每分钟大约降低1°C。
  
  3、必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO或者甘油等冷冻保护剂
  
  4、将冷冻的细胞于-70°C以下温度储存;温度高于-50°C时,冷冻的细胞将开始变质。
  
  5、必须使用无菌冻存管储存冷冻的细胞。装有冷冻细胞的冻存管可浸于液氮或者在液氮上方的气相空间内保存
  
  6、必须穿戴个人防护设备。
  
  7、所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态。必须采用正确的无菌技术,并且在层流通风橱内进行。
  
  对培养的鼠角膜上皮细胞进行冻存的方法是将细胞置于含有(DMSO)等冷冻保护剂的完全培养基中于液氮中储存。冷冻保护剂可降低培养基的冰点,并可减缓冷却速度吗,大大降低冰晶形成的危险(冰晶可损伤细胞,导致细胞死亡)。